Chemické zloženie nehrdzavejúcej ocele 347 Veľkosť venóznej alebo kapilárnej krvi, špecifická pre SARS-CoV-2, reakcie T-buniek určuje imunitu voči COVID-19.

Ďakujeme, že ste navštívili Nature.com.Používate verziu prehliadača s obmedzenou podporou CSS.Pre najlepší zážitok vám odporúčame použiť aktualizovaný prehliadač (alebo vypnúť režim kompatibility v programe Internet Explorer).Okrem toho, aby sme zabezpečili nepretržitú podporu, zobrazujeme stránku bez štýlov a JavaScriptu.
Posuvníky zobrazujúce tri články na snímke.Na posúvanie medzi snímkami použite tlačidlá späť a ďalej, na posúvanie sa po jednotlivých snímkach použite tlačidlá ovládača posúvania na konci.

Chemické zloženie nehrdzavejúcej ocele 347

Chemické zloženie špirálovej rúrky z nehrdzavejúcej ocele 347

Chemické zloženie a mechanické vlastnosti špirálovej rúrky z nehrdzavejúcej ocele 347 sú nasledovné:
- Uhlík – 0,030% max
- chróm - 17-19%
- nikel - 8-10,5%
- Mangán – 1% max

Mechanické vlastnosti špirálovej rúrky z nehrdzavejúcej ocele 347

Podľa výrobcu špirálovej rúrky z nehrdzavejúcej ocele 347 mechanické vlastnosti špirálovej rúrky 347:
- Pevnosť v ťahu (psi) – 75 000 min
- Medza klzu (psi) – 30 000 min
- Predĺženie (% v 2″) – 25 % min
- Tvrdosť podľa Brinella (BHN) – 170 max

Aplikácie a použitie špirálovej rúrky z nehrdzavejúcej ocele 347

• Trubka z nehrdzavejúcej ocele 347 používaná v cukrovaroch.
• Cievka z nehrdzavejúcej ocele 347 používaná v hnojive.
• Cievka z nehrdzavejúcej ocele 347 používaná v priemysle.
• Cievka z nehrdzavejúcej ocele 347 používaná v elektrárňach.
• Cievka z nehrdzavejúcej ocele 347 používaná v potravinách a mliečnych výrobkoch.
• Cievka z nehrdzavejúcej ocele 347 používaná v ropných a plynárenských závodoch.
• Výrobca špirálových rúrok z nehrdzavejúcej ocele 347 používaný v lodnom priemysle.

Predpokladá sa, že T bunky špecifické pre SARS-CoV-2 chránia pred infekciou a progresiou COVID-19, ale neexistuje pre to žiadny priamy dôkaz.Tu sme porovnávali merania plnej krvi T-buniek pozitívnych na interferón-γ špecifických na SARS-CoV-2 s pozitívnymi výsledkami diagnostického testu COVID-19 (PCR a/alebo laterálny prietok) do 6 mesiacov od odberu krvi Lian.Medzi 148 účastníkmi, ktorí darovali vzorky venóznej krvi, bola veľkosť reakcie T-buniek špecifických pre SARS-CoV-2 významne vyššia u tých, ktorí zostali chránení, ako u tých, ktorí boli infikovaní (P < 0,0001).% riziko infekcie, pričom vysoká intenzita toto riziko znížila na 5,4 %.Tieto výsledky boli zovšeobecnené na ďalších 299 účastníkov, ktorí testovali škálovateľný kapilárny krvný test, ktorý by mohol uľahčiť prístup k údajom o imunite T-buniek na úrovni populácie (14,9 % oproti 4,4 %).Meranie T buniek špecifických pre SARS-CoV-2 teda môže predpovedať riziko infekcie a malo by sa hodnotiť pri monitorovaní imunitného stavu jednotlivca a populácie.
Meranie a pochopenie imunitnej odpovede na infekciu SARS-CoV-2 je dôležité pre vývoj účinných budúcich stratégií na minimalizáciu dopadov budúcich prepuknutia COVID-19 na verejné zdravie a ekonomiku.Identifikácia imunitných korelátov poskytne dôležité informácie o náchylnosti populácie na vírusovú infekciu, prípadne včasné varovanie pred najvyšším počtom hospitalizácií a tiež umožní ľuďom osobne riadiť svoje riziko infekcie a riziko nakazenia iných.Imunitný dohľad sa ukázal ako rozhodujúci pri hodnotení účinnosti vakcín COVID-19 u zdravých a vysokorizikových pacientov1,2,3 najmä u mutantov SARS-CoV-24 a detekcia imunokompromitovaných bude znamenať potrebu posilniť imunitu Nechajte sa zaočkovať a predchádzať budúce ohniská.
Úroveň imunity jednotlivca voči infekcii SARS-CoV-2 závisí od viacerých faktorov: vírusová záťaž v čase expozície, varianty vírusu, vek, predchádzajúci stav očkovania/infekcie, komorbidity, lieky, a čo je najdôležitejšie, infekcia anti-SARS-CoV. .2 adaptívna imunitná odpoveď nastáva v čase expozície vírusu5.Hodnotenie imunitnej odpovede na infekciu SARS-CoV-2 a/alebo očkovanie sa zameralo na sérologické testy, ktoré merajú prítomnosť protilátok špecifických pre štrukturálny proteín (napr. hrotový glykoproteín).Samotná prítomnosť alebo neprítomnosť protilátok však presne neurčuje ochrannú imunitnú odpoveď, pretože reakcie sú časom výrazne oslabené6 a neutralizácia variantov SARS-CoV-2 u zotavujúcich sa alebo dvakrát očkovaných jedincov Slabá aktivita, ktorá by mohla viesť k veľkej počet prelomových infekcií7.Ochrana proti symptomatickému COVID-19 spôsobenému variantom Omicron (B.1.1.529) sa skutočne znížila na približne 10 % už po 4 – 6 mesiacoch očkovania mRNA, hoci ochrana pred závažným ochorením pretrvávala > 68 % najmenej 7 mesiacov8.Meranie odpovedí adaptívnych pamäťových T buniek, ktoré poskytujú dlhodobú ochranu pred vírusovou infekciou, je najlepším indikátorom náchylnosti na infekciu SARS-CoV-2, a preto lepšou indikáciou rizika pozitívneho testovania na COVID-199, pretože špecifický T bunky môžu zabrániť infekcii.bez sérokonverzie10,11.Meraniu reakcií T buniek sa však venovala menšia pozornosť kvôli metodologickým ťažkostiam a logistickým problémom pri získavaní a transporte vzoriek venóznej krvi, najmä pri vykonávaní veľkých pozorovacích štúdií na hodnotenie účinnosti vakcíny a monitorovania imunity.Zaočkovaní jedinci však vykazujú silnú aktivitu T buniek proti variantom SARS-CoV-2, čo potenciálne kompenzuje stratu reaktivity protilátok, aby sa obmedzila závažnosť COVID-1912,13.
Tu sme sa snažili pochopiť, či jediné meranie reakcie T-buniek SARS-CoV-2 môže predpovedať absolútne riziko infekcie SARS-CoV-2 do 6 mesiacov od odberu krvi, bez ohľadu na predchádzajúce faktory ovplyvňujúce imunitu.Aby bol test T buniek vysoko výkonný a použiteľný na väčšie štúdie, pokúsili sme sa tiež urobiť test miniaturizovaný tak, aby sa dal vykonať pomocou kapilárnej vzorky krvi z prsta.
Merali sme bunkové a humorálne imunitné reakcie u zdravých darcov pomocou kombinovanej detekcie SARS-CoV-2 T buniek a IgG protilátok na základe celej venóznej krvi (charakteristiky účastníkov pozri marec 2022 14. U očkovaných darcov SARS-CoV-2- špecifické T-bunkové odpovede sa určili meraním hladín plazmatického interferónu-y (IFN-y) po stimulácii plnej krvi peptidom SARS-CoV-2 (ako predtým, odkazy 14, 15, 16, 17, 18) a súvisiace odpovede IgG s nukleokapsidom (N) boli zvýšené u tých, ktorí hlásili predchádzajúcu infekciu, hoci obe reakcie boli vyššie u predtým infikovaných neočkovaných darcov, maximálne v tele (obr. 1a,b).Odpovede IgG proti spike glykoproteínom (RBD, S1, S2) boli najvyššie u predtým infikovaných očkovaných darcov (obrázok 1c–e).
reakcie IFN-γ+ T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 sa merali testom plnej žilovej krvi a na základe očkovania účastníkov a stavu predchádzajúcej infekcie SARS-CoV-2 (potvrdené PCR a/alebo testom laterálneho prietoku)' Vac + /Inf +' n = 60 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 82 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žltá), 'Vac-/Inf-' n = 1 (Neuplatňuje sa).Väzbové reakcie IgG špecifické pre SARS-CoV-2 sa zameriavajú na nukleokapsid (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), doménu viazania na ostrý receptor (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), vrcholová podjednotka 1 („S1“) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) a vrcholová podjednotka 2 (“S2”) (e) bola meraná testami plnej žilovej krvi a na základe očkovania účastníka a predchádzajúcej SARS-CoV-2 (potvrdené pomocou PCR a/ alebo test laterálneho prietoku) infekčný stav.'Vac + /Inf +' n = 60 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žltá).Porovnania sa uskutočnili pomocou Kruskal-Wallisovho testu, upraveného pre viacnásobné porovnania pomocou Dunnovho testu.Údaje sú zobrazené ako grafy (stredná čiara na mediáne, horná hranica na 75. percentile, spodná hranica na 25. percentile) s fúzmi na minimálnych a maximálnych hodnotách.Každá bodka predstavuje darcu.Nespracované údaje sa poskytujú vo forme súborov s nespracovanými údajmi.
Po odbere krvi boli účastníci požiadaní, aby sami nahlásili pozitívne výsledky testu PCR a/alebo laterálneho prietoku na COVID-19;ak boli účastníci pozitívne testovaní medzi 1. septembrom 2021 a 29. decembrom 2021, predpokladalo sa, že boli infikovaní koronavírusom Delta (B.1.617.2) variantom koronavírusu a Omicron (B.1.1.529) pre Public Health Wales po 29. decembri 2021, kedy táto možnosť záujmu sa stáva dominantnou.Spomedzi 148 hodnotiteľných darcov sme pozorovali mieru infekcie 26,3 % (39/148) do 6 mesiacov od darovania krvi, pričom 38 z nich dostalo druhú alebo tretiu dávku vakcíny COVID-19 (prelom infekcie nastal po Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA vakcína alebo vakcína AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));nakazil sa aj neočkovaný darca.Veľkosť odpovedí T-buniek pozitívnych na SARS-CoV-2 špecifických na IFN-γ bola výrazne nižšia u tých, ktorí hlásili pozitívny diagnostický test na COVID-19, ako u neinfikovaných darcov (P < 0,0001; Obr. 2a), najmä v dôsledku optimálna indukcia reakcií T buniek očkovaním u niektorých účastníkov (P = 0,050; doplnkový obrázok 1).Neexistovala žiadna korelácia medzi veľkosťou odpovede IFN-y+ T buniek a časom do pozitívneho výsledku testu COVID-19 (doplnkový obrázok 2).Na rozdiel od toho, ani RBD-, S1-, S2-väzbové IgG reakcie (obrázky 2b–d), ani RBD-, S1-neutralizujúce protilátkové reakcie neboli špecifické pre SARS-CoV-2 divokého typu alebo delta (B.1.617).) (doplnkový obr. 3) dokáže rozlíšiť medzi ľuďmi ohrozenými infekciou.Nízke N-viazané IgG odpovede proti SARS-CoV-2 však korelovali s rizikom infekcie COVID-19 (P = 0,0084; obrázok 2e);tí, ktorí boli pozitívne testovaní, mali o 85 % menšiu pravdepodobnosť (P = 0,00035; ALEBO 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (doplnkový obrázok 4).
Vzorky venóznej krvi od zdravých darcov (n = 148) hodnotili reakcie IFN-γ+ T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) a väzbu Spikeho receptora na špecifický SARS-CoV -2 stimul.doména („RBD“) (b), podjednotka špičky 1 („S1″) (c), podjednotka špičky 2 („S2″) (d) a nukleokapsid („N“) (e; **P = 0,0084 ) .Identifikovaní účastníci, ktorí boli pozitívne testovaní na COVID-19 (PCR a/alebo laterálny tok);všetky infekcie sa vyskytli do 6 mesiacov od odberu krvi.Porovnania sa uskutočnili pomocou dvojstranného Mann-Whitneyho testu.Údaje sú zobrazené ako grafy (stredná čiara na mediáne, horná hranica na 75. percentile, spodná hranica na 25. percentile) s fúzmi na minimálnych a maximálnych hodnotách.Každá bodka predstavuje darcu.ns nie je dôležité.Tepelná mapa f ukazuje Spearmanove poradové korelácie medzi premennými pre špecifikovaný súbor údajov.Porovnania, ktoré neboli štatisticky významné, boli vylúčené z matrice a označené prázdnymi bunkami.Nespracované údaje sa poskytujú vo forme súborov s nespracovanými údajmi.
Prednastavená diagnostická pozitívna hranica 14 sa považovala za príliš svojvoľnú na posúdenie rizika opätovnej infekcie, preto sa na stanovenie parametrov absolútneho rizika stanovili interkvartilné rozsahy.Štatistický model, ktorý zahŕňal iba premenné, ktoré mali významný vplyv na výsledky, ukázal, že veľkosť odpovede IFN-γ+ T buniek špecifických na SARS-CoV-2 bola najdôležitejším imunitným biomarkerom na určenie šancí jednotlivca byť testované na COVID.-19 pozitívnych (obrázok 2f a doplnkový obrázok 4).Pacienti s odpoveďou T-buniek IFN-γ+ špecifickou pre SARS-CoV-2 v treťom (194 – 489 pg/ml IFN-γ) a štvrtom (>489 pg/ml IFN-γ) kvartile 65 % (P = 0,055; OR 0,35, 95 % CI: 0,11–1,00) a 90 % (P = 0,0050; OR 0,098, 95 % CI: 0,014–0,42) mali viac účastníkov.Šance sú malé (doplnkový obr. 4).Celkovo mali účastníci s odpoveďou T-buniek špecifickou pre SARS-CoV-2 z venóznej krvi ≤ 79 pg/ml IFN-γ 43,2 % riziko prelomovej infekcie po 6 mesiacoch v porovnaní s odpoveďou > 489 pg/ml.ml IFN-γ malo riziko infekcie 5,4 % (tabuľka 2).
Vyšetrenie celej žilovej krvi má obmedzený rozsah z dôvodu potreby odberu vzorky flebotómom.Na zvýšenie dostupnosti testovania T buniek a IgG na SARS-CoV-2 bola vyvinutá alternatívna metóda odberu kapilárnej krvi, ktorá účastníkom umožní získať vzorky krvi z prsta doma.Pokiaľ je nám známe, neexistujú žiadne predchádzajúce správy o meraní funkcie antigén-špecifických T buniek vo vzorkách kapilárnej krvi.Už skôr bola preukázaná silná korelácia medzi počtom lymfocytov získaným použitím porovnateľných vzoriek kapilárnej a venóznej krvi.Okrem toho sa uvádza, že testy na báze plnej krvi merajúce reakcie T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 používajú iba 320 μl venóznej krvi20, čím sa eliminujú obavy z frekvencie progenitorových T buniek vo vzorkách kapilárnej krvi.
Tento vysokovýkonný štandardizovaný kolaboratívny test SARS-CoV-2 T buniek a IgG protilátok založený na kapilárnej plnej krvi sme použili na meranie bunkovej a humorálnej imunitnej odpovede u účastníkov s rôznymi komorbiditami a predchádzajúcim očkovaním / stavom infekcie (tabuľka 1).regrutovaní z celého Spojeného kráľovstva v období od 24. januára do 14. marca 202214. Väčšina (90,9 %) vzoriek prstov bola získaná správne a odoslaná do laboratória do 24 hodín od odberu.V niektorých prípadoch boli vzorky prijaté do 48 hodín od odberu krvi, ale žiadna z týchto vzoriek neprešla kontrolami kvality a neovplyvnila celkové merania T buniek alebo protilátok (doplnkový obrázok 5).Hoci u niektorých jedincov existovali rozdiely vo veľkosti odozvy IFN-γ+ T-buniek špecifických pre SARS-CoV-2 merané v príslušných vzorkách kapilárnej a venóznej krvi u niektorých jedincov, celkovo neboli žiadne významné rozdiely (P = 0,88; doplnkový obrázok 6 ).).
Reakcie IFN-y+ T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 boli významne zvýšené u očkovaných jedincov, ktorí tiež hlásili predchádzajúcu infekciu (P = 0, 0001), ale nie významne vyššie ako u predtým infikovaných nezaočkovaných darcovských jedincov ( P = 0, 19, obr. 3a).).Odpovede IgG proti vrcholovému glykoproteínu (RBD, S1, S2) boli významne vyššie u očkovaných darcov ako u neočkovaných darcov, bez ohľadu na predchádzajúci stav infekcie (obrázok 3b-d).Je zaujímavé, že priemerná N-viazaná IgG odpoveď bola najvyššia u predtým infikovaných neočkovaných účastníkov v porovnaní s očkovanými účastníkmi, hoci to nedosiahlo význam (obrázok 3e).Spomedzi neočkovaných a neinfikovaných darcov, ktorí sa sami deklarovali, bolo 15 z 37 (40,5 %) účastníkov pozitívnych na N-viazaný IgG, nad predtým stanoveným prahom 2,0 BAU/ml14;týchto 15 účastníkov Dvanásť z týchto pacientov bolo pozitívne testovaných na odpoveď IFN-y+ T buniek nad predtým stanovenú hranicu 22,7 pg/ml IFN-y14.Preto je pravdepodobné, že títo účastníci boli predtým infikovaní SARS-CoV-2 a neboli testovaní na COVID-19 z dôvodu osobného výberu, nedostatku PCR a/alebo zariadenia na laterálny prietok alebo boli asymptomatickí.Hoci existovala významná korelácia medzi odpoveďami T buniek na hladiny IFN-y+ a N-viazaného IgG u neočkovaných darcov (P = 0,0044; doplnkový obrázok, N-viazaná IgG odpoveď klesala rýchlejšie ako N-viazaná IgG odpoveď, zatiaľ čo IFN-y + Reakcie T buniek sa zachovali bez ohľadu na stav vakcinácie, hoci počet darcov 50 týždňov po provokácii bol nízky (doplnkový obrázok 8). Typ očkovania bol vo všeobecnosti málo odlišný v pozorovaných reakciách IgG špecifických pre SARS-CoV-2, T bunky a spojené s RBD, hoci účastníci, ktorí dostali dve dávky BNT162b2, po ktorých nasledovala revakcinácia mRNA1273, ukázali výrazne vyššie hladiny IFN-y + T buniek boli citlivejšie na SARS-CoV-2 ako tí, ktorí dostali dve dávky ChAdOx1 a BNT162b2 (doplnkové Obr. 9) Okrem toho uvádzané komorbidity mali malý celkový rozdiel v pozorovaných reakciách T buniek v porovnaní so zdravými darcami (doplnkový obrázok 10).
reakcie IFN-y+ T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 sa merali pomocou kapilárneho testu plnej krvi a boli založené na očkovaniach účastníkov a predchádzajúceho infekčného stavu SARS-CoV-2 (potvrdené pomocou PCR a/alebo testu laterálneho prietoku).'Vac + /Inf +' n = 42 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 158 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 33 (žltá), 'Vac- /Inf-' n = 37 (sivá).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .Väzbové reakcie IgG špecifické pre SARS-CoV-2 k väzbovej doméne spike receptora („RBD“) (b; ****P < 0,0001, ns: nevýznamné), spike podjednotka 1 („S1“) (c; * * **P < 0,0001, ns: nevýznamné), vrcholová podjednotka 2 („S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) a nukleokapsid („N“) (e; ****P < 0,0001, ns nevýznamné) boli merané pomocou analýzy plnej žilovej krvi a na základe očkovania účastníkov a predchádzajúceho SARS-CoV-2 (potvrdené pomocou PCR a/alebo analýzy laterálneho toku) Infekcie boli rozdelené podľa postavenie.'Vac + /Inf +' n = 46 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 182 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 34 (žltá), 'Vac-/Inf-' n = 37 (sivá).Porovnania sa uskutočnili pomocou Kruskal-Wallisovho testu, upraveného pre viacnásobné porovnania pomocou Dunnovho testu.Údaje sú zobrazené ako grafy (stredná čiara na mediáne, horná hranica na 75. percentile, spodná hranica na 25. percentile) s fúzmi na minimálnych a maximálnych hodnotách.Každá bodka predstavuje darcu.Nespracované údaje sa poskytujú vo forme súborov s nespracovanými údajmi.
Rovnako ako predtým boli účastníci požiadaní, aby nahlásili pozitívne výsledky PCR a/alebo laterálneho prietoku krvi pre COVID-19;podľa britskej zdravotníckej agentúry sa predpokladalo, že účastníci boli infikovaní koronavírusom Omicron (B.1.1.529) v čase testovania pozitívneho variantu vírusu, keďže to bol dominantný variant v Spojenom kráľovstve počas obdobia štúdie.Spomedzi 299 hodnotiteľných darcov sme pozorovali mieru infekcie 8,0 % (24/299) do troch mesiacov od darcovstva kapilár, pričom sedem z nich nebolo očkovaných.Podiel komorbidít medzi všetkými účastníkmi bol nižší u tých, ktorí boli pozitívne testovaní na COVID-19 (10,7 %) ako u tých, ktorí boli testovaní na COVID-19 negatívne (24,4 %, tabuľka 1), čo môže byť spôsobené tým, že účastníci s určitými choroby sú opatrnejšie a chránia pred potenciálnymi následkami, ako je cukrovka a rakovina.Ako bolo pozorované v kohorte venóznej krvi, SARS-CoV-2-špecifické na interferón-y (IFN-y)-pozitívne T bunky merané vo vzorkách kapilárnej krvi od jednotlivcov, ktorí mali pozitívny diagnostický test na COVID-19.Veľkosť odpovede bola významne nižšia ako u neinfikovaných darcov (P = 0,034; obrázok 4a) v dôsledku relatívne slabej indukcie reakcie T buniek očkovaním a / alebo predchádzajúcou infekciou (doplnkový obrázok 11).Podobne ani RBD-, S1-, S2-väzbové IgG reakcie (obrázky 4b–d), ani RBD-, S1-neutralizujúce protilátkové reakcie neboli špecifické pre SARS-CoV-2 divokého typu alebo delta (B. 1.617).(Doplnkový obrázok 12).Je možné identifikovať jedincov s akýmkoľvek významným rizikom infekcie.Na rozdiel od venóznej kohorty, odpovede IgG súvisiace s N tiež nerozlišujú riziko COVID-19 (obrázok 4e), čo naznačuje, že variant Omicron (B.1.1.529) zvyšuje úniky imunity u predtým infikovaných jedincov, ako bolo nedávno opísané 21. Na rozdiel od toho, sila odozvy IFN-y T buniek špecifickej pre SARS-CoV-2 bola opäť najdôležitejšou premennou pri určovaní individuálnych pravdepodobností pozitívneho testovania na COVID-19 (obrázok 4f).Celkovo mali účastníci s odpoveďou kapilárnych T-buniek špecifickou pre SARS-CoV-2 ≤ 23,7 pg/ml IFN-γ 14,9 % riziko infekcie po troch mesiacoch v porovnaní s odpoveďou > 141,6 pg/ml.ml IFN.-γ mal riziko infekcie 4,4 % (tabuľka 2).
Reakcie IFN-y+ T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) a SARS-CoV-2 špecifickú doménu viazania receptora zacieleného na IgG („RBD“) (b), vrcholová podjednotka 1 (' S1') (c), spike podjednotka 2 ('S2') (d) a nukleokapsidová väzbová reakcia ('N') (e).Účastníci identifikovaní ako pozitívni na testy COVID-19 (PCR a/alebo test laterálneho prietoku krvi), všetky infekcie sa vyskytli do 3 mesiacov od odberu krvi.Porovnania sa uskutočnili pomocou dvojstranného Mann-Whitneyho testu.Údaje sú zobrazené ako grafy (stredná čiara na mediáne, horná hranica na 75. percentile, spodná hranica na 25. percentile) s fúzmi na minimálnych a maximálnych hodnotách.Každá bodka predstavuje darcu.ns nie je dôležité.Tepelná mapa f ukazuje Spearmanove poradové korelácie medzi premennými pre špecifikovaný súbor údajov.Porovnania, ktoré neboli štatisticky významné, boli vylúčené z matrice a označené prázdnymi bunkami.Nespracované údaje sa poskytujú vo forme súborov s nespracovanými údajmi.
Keď prejdeme do ďalšej fázy pandémie COVID-19, zameranie sa presunie z prevencie na individuálny manažment rizík a identifikáciu zraniteľných členov spoločnosti.Stanovenie korelátov imunity voči COVID-19 je rozhodujúce pre účinnú identifikáciu a liečbu týchto vysoko rizikových skupín.V súčasnosti pribúda dôkazov, že imunita T-buniek chráni pred infekciou SARS-CoV-2 a obmedzuje závažnosť COVID-1910.Údaje uvedené v tomto dokumente ukazujú, že kombinovaná sila reakcií IFN-y+ T buniek špecifických na SARS-CoV-2 proti spike, membránovým a nukleokapsidovým štrukturálnym proteínom poskytuje väčšiu ochranu proti COVID-19 ako väzba protilátok.19 podporuje alebo neutralizuje reakcie .a mali by sa vziať do úvahy pri posudzovaní imunity jednotlivca a/alebo stáda.RNA vírusy ako SARS-CoV-2 alebo vírus chrípky A (IAV) sa vyhýbajú sérologickej neutralizácii rýchlo sa vyvíjajúcimi exponovanými B-bunkovými epitopmi na povrchových antigénoch rozpoznávaných protilátkami.Ochranná imunitná reakcia poskytovaná T bunkami môže odrážať zacielenie epitopov z viac konzervovaných oblastí vírusových proteínov, ktoré nemôžu rýchlo uniknúť imunitnej reakcii.Ochrana sprostredkovaná T bunkami proti novým variantom SARS-CoV-2 je podobná heterosubtypovej ochrane sprostredkovanej T bunkovým zacielením na konzervované vnútorné proteíny pozorované v podtypoch IAV22, 23.
Napriek obrovskému potenciálu na meranie bunkovej imunitnej odpovede na COVID-19 sa vývoju presných, vysokovýkonných a štandardizovaných testov na T-bunkách venovala relatívne malá pozornosť.Tradičné zložitosti a náklady spojené s meraním reakcií T buniek bránia presnému stanoveniu imunity T buniek pri skríningu imunity veľkej populácie.Zatiaľ čo nedávno bolo dostupných niekoľko komerčných testov na stimuláciu peptidov v plnej krvi, každý v súčasnosti potrebuje na získanie krvi flebotomistu, čo obmedzuje dostupnosť a rozsah.Systémy kapilárnej krvi sa široko používajú na určenie prevalencie protilátok proti SARS-CoV-2 v populácii.Prispôsobili sme kapilárne krvné testy na uskutočnenie testov stimulácie peptidov v plnej krvi na posúdenie reaktivity T buniek na štrukturálne proteíny SARS-CoV-2 a špecifické protilátkové odpovede SARS-CoV-2.V skutočnosti je kombinované meranie protilátok špecifických pre SARS-CoV-2 a T buniek v tej istej vzorke kapilárnej krvi veľmi atraktívne: (i) znižuje potrebu viacerých krvných testov na jedného účastníka, (ii) zlepšuje skúsenosti a porozumenie účastníka;(iii) zlepšiť logistiku a znížiť duplicitu; (iv) znížiť vplyv na životné prostredie, keďže sa vyžaduje menej laboratórneho spotrebného materiálu a dodávky vzoriek.Hoci celková reaktivita IFN-γ bola podobná medzi zodpovedajúcimi vzorkami venóznej a kapilárnej krvi, pozorovalo sa, že bola nižšia v kohorte z kapilárnej krvi účastníkov (obr. 4a) v porovnaní s kohortou venóznej krvi (obr. 2a).Hodnoty IFN-γ Pre toto zistenie existuje niekoľko vysvetlení, konkrétne veľký počet účastníkov s komorbiditami vyžadujúcimi imunosupresívnu liečbu bol prijatý do kohorty odberu kapilárnej krvi (tabuľka 1) a životaschopnosť a/alebo funkcia T buniek získaných z ciev vzorky môžu byť nízke, najmä ak sa berú do úvahy podmienky dlhodobého skladovania vzoriek pred stimuláciou peptidom.
V súčasnosti široko dostupná vakcína proti COVID-19 poskytuje najlepšiu ochranu pred závažným ochorením pre väčšinu príjemcov do 6 mesiacov od očkovania8.Povzbudivé je, že napriek slabej vakcínou vyvolanej sérologickej neutralizácii variantov SARS-CoV-26,7 zostali reakcie T-buniek vyvolané očkovaním proti divokému typu SARS-CoV-2 vysoko reaktívne, keďže sa objavilo 25 ďalších.Údaje, ktoré tu uvádzame, demonštrujú dôležitosť širšieho hodnotenia imunogenicity vakcín, pričom zdôrazňujú vakcíny s nedostatočnou imunitou T-buniek, aby sa zabránilo náhlej infekcii a pretrvávajúcemu prenosu vírusu.Tiež sme pozorovali, že mnoho nezaočkovaných jedincov prijatých do kapilárnej kohorty malo významnú odpoveď na SARS-CoV-2-špecifické T bunky (a N-viažuce IgG) bez ohľadu na predchádzajúce očkovanie, čo je pravdepodobne spôsobené predchádzajúcou infekciou.Namiesto očkovania vhodných jedincov by sa malo ich riziko infekcie posúdiť na základe ich aktuálneho stavu imunizácie a informovaných rozhodnutí.
Obmedzenia tejto štúdie zahŕňajú uistenie, že účastníci sami nahlásili infekciu SARS-CoV-2 po odbere krvi na určenie relevantnosti imunity;niektorí účastníci môžu mať asymptomatickú infekciu a nie sú schopní podstúpiť testovanie PCR a/alebo laterálneho prietoku na COVID-19.V našom súbore údajov tiež chýbali informácie o liekoch účastníkov v čase odberu krvi.Okrem toho, vzhľadom na to, že všetci naši účastníci hlásili len mierne/stredne závažné symptómy alebo žiadne symptómy, nebolo možné z nášho súboru údajov identifikovať imunitné reakcie, ktoré by predpovedali zvýšené riziko závažných ochorení a hospitalizácie pre COVID-19.Prítomnosť reakcií CD8+ T buniek proti epitopom špecifickým pre nukleokapsidy sa však nedávno spájala s ochranou proti závažnému COVID-1926.Okrem toho tu použitý test nemeral reakcie T buniek na špecifické skoré exprimované neštrukturálne proteíny SARS-CoV-2, o ktorých sa nedávno ukázalo, že sa prednostne akumulujú u séronegatívnych zdravotníckych pracovníkov, ktorí boli v kontakte s infikovanými pacientmi.Na základe tejto práce, vzhľadom na prevalenciu komunitného prenosu v čase náboru a vysokú pravdepodobnosť kontaktnej infekcie v populácii, sa zdá, že počet T buniek špecifických pre SARS-CoV-2 nájdených v našich testoch je tiež schopný odstraňovania.subklinické infekcie v našich kohortách.Nakoniec sme nemerali produkciu interleukínu 2 T bunkami, pretože naša predchádzajúca práca preukázala slabú identifikáciu reakcií T-buniek špecifických pre SARS-CoV-214, hoci reakcie špecifické pre IL-2 môžu naznačovať už existujúcu krížovú reaktivitu.bunky spojené s obranou proti infekcii SARS-CoV-211.
Celkovo tieto údaje zdôrazňujú základnú potrebu dlhodobých dlhodobých štúdií, ktoré začleňujú reakcie T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 do meraní imunity na úrovni populácie.Tomuto úsiliu môže pomôcť vývoj nového kapilárneho krvného testu, ktorý meria odpoveď T-buniek.
Výskumný projekt prijímal účastníkov od februára 2021 do marca 2022. Kohortu zdravých darcov (n = 148), ktorí darovali vzorky venóznej krvi, tvorili predovšetkým univerzitní zamestnanci a študenti zúčastňujúci sa skríningovej služby COVID-19 Cardiffskej univerzity alebo zamestnanci základnej školy v Cardiff.Všetci účastníci boli inak zdraví a neuviedli, že užívali žiadne imunosupresívne lieky (charakteristiky pozri v tabuľke 1).Kohorta účastníkov, ktorí darovali vzorky kapilárnej krvi, zahŕňala všetkých dobrovoľných darcov (vo veku 18+) z celého Spojeného kráľovstva.V období od 24. januára do 14. marca 2022 bolo do štúdie zaradených 342 účastníkov, z ktorých 299 odovzdalo vzorky krvi do laboratória.Mnohí účastníci zostali neočkovaní a/alebo hlásili závažné komorbidity vrátane autoimunitných ochorení a rakoviny (charakteristiky pozri v tabuľke 1).Táto štúdia získala etické schválenie od Etického výboru pre výskum v Newcastle a North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) a od Etického výboru pre výskum lekárskej fakulty Univerzity v Cardiffe (ref. SREC: SMREC 21/01).Všetci účastníci dali pred zaradením písomný informovaný súhlas.Účastníci nedostali žiadnu odmenu za účasť v tejto štúdii.
Vzorky venóznej krvi sa získali vpichom do 6 alebo 10 ml lítiových alebo sodných heparínových vákuových nádob (BD).Vzorky kapilárnej krvi sa získali pomocou prstovej lancety a potom sa odobrali do heparínových mikronádobiek (BD).Vyžaduje sa minimálne 400 µl krvi;každá vzorka nižšia ako toto množstvo bude zamietnutá.Ďalšie dôvody odmietnutia vzorky zahŕňali masívnu koaguláciu a / alebo hemolýzu a zlyhanie pri odbere viskóznej plazmy na analýzu (doplnkový obrázok 5).Celkovo bolo k dispozícii 299 vzoriek kapilárnej krvi na hodnotenie protilátkových reakcií, z ktorých 270 vzoriek bolo dostupných aj na hodnotenie reakcií T buniek.
Reakcie T-buniek špecifické pre SARS-CoV-2 sa hodnotili pomocou testu COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) a uskutočnili sa tak, ako bolo opísané vyššie14.V stručnosti, jeden 6 ml alebo 10 ml heparín sodný (BD) venózny vakutainer bol odobratý každému účastníkovi a spracovaný v laboratóriu do 12 hodín od odberu krvi.Hoci väčšina vzoriek bola spracovaná do 24 hodín, jedna 400–600 μl heparinizovanej mikrobleedingovej (BD) kapilárnej krvi sa odobrala do 48 hodín od odberu vzoriek z prsta.Vzorky venóznej a/alebo kapilárnej krvi boli stimulované samostatnými peptidovými zásobami špecifickými pre SARS-CoV-2 (variant divokého typu), ako už bolo opísané14.Táto peptidová knižnica obsahuje 420 15-mérových sekvencií s 11 prekrývajúcimi sa aminokyselinami pokrývajúcimi celý vrcholový proteín (S1 a S2) (S; NCBI proteín: QHD43416 1), nukleokapsidový fosfoproteín (NP; NCBI proteín: QHD43423 2) a membránový glykoproteín (M NCBI proteín: QHD43419 1) kódujúce sekvencie (označované ako „S-/NP-/M-kombinatorická peptidová knižnica“).Všetky peptidy boli purifikované na > 70 %, rozpustené v sterilnej vode a použité v konečnej koncentrácii 0,5 ug/ml na peptid.Vzorky sa inkubovali pri 37 °C počas 20-24 hodín.Skúmavky sa potom centrifugovali pri 5000 x g počas 3 minút a z hornej časti každej vzorky krvi sa odobralo -150 ul plazmy.Pred vykonaním testov na detekciu cytokínov/protilátok uchovávajte vzorky plazmy pri -20 °C až jeden mesiac.
IFN-y sa meral pomocou IFN-y ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, katalógové číslo 430116) a uskutočňoval sa podľa pokynov výrobcu.Ihneď po pridaní zastavovacieho roztoku (2N H2S04) sa mikroplatnička odčítala pri 450 nm s použitím BioLegend Mini ELISA platňovej čítačky.IFN-y sa kvantifikoval extrapoláciou štandardnej krivky pomocou GraphPad Prism.Hodnoty pod dolným detekčným limitom testu boli zaznamenané ako 7,8 pg/ml, hodnoty nad horným detekčným limitom testu boli zaznamenané ako 1000 pg/ml.
Protilátky IgG proti SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N sa merali pomocou panelu Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, kat. č. 12014634) a označili sa podľa pokyny výrobcu.inštrukcie .Vzorky vykazujúce hodnoty nad limitom kvantifikácie boli opätovne analyzované pri riedení 1:1000.Priemerná intenzita fluorescencie guľôčok sa merala na prístroji Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Koncentrácie protilátok boli vypočítané jednoduchým kontrolným testom VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) a prevedené na WHO/NIBSC 20/136 medzinárodných referenčných štandardných jednotiek (BAU/ml) s použitím kalibračného faktora výrobcu.
Neutralizačné protilátky špecifické pre podjednotku RBD a S1 proti SARS-CoV-2 divokého typu a delta (B.1.617) líniám SARS-CoV-2 sa merali pomocou Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad , obj. č. 12016897), podľa pokynov výrobcu.Zmerajte priemernú intenzitu fluorescencie na Bio-Plex 200 (Bio-Rad) a vypočítajte percento inhibície (tj neutralizácie) pomocou nasledujúceho vzorca:
Infekčné neutralizačné testy pre SARS-CoV-2 sa uskutočnili tak, ako už bolo opísané28.Stručne, 600 PFU divokého typu SARS-CoV-2 sa inkubovalo s 3-násobnými sériovými riedeniami plazmy v duplikáte počas 1 hodiny pri 37 °C.Zmes sa potom pridala k bunkám VeroE6 na 48 hodín.Monovrstvy boli fixované 4 % paraformaldehydom, permeabilizované 0,5 % NP-40 a inkubované počas 1 hodiny v blokovacom pufri (PBS obsahujúci 0,1 % tween a 3 % odstredené mlieko).Primárna protilátka (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) sa pridala do blokovacieho pufra na 1 hodinu pri teplote miestnosti.Po premytí bola do blokovacieho pufra na 1 hodinu pridaná sekundárna protilátka (anti-myšia IgG-HRP, Pierce).Monovrstvy sa premyli, vyvolali s použitím Sigmafast OPD a odčítali sa na čítačke platní Clariostar Omega.Jamky bez vírusu, bez vírusu, ale bez protilátok a normalizované séra vykazujúce strednú aktivitu boli zahrnuté do každého experimentu ako kontroly.
Štatistická analýza sa uskutočnila v GraphPad Prism (verzia 9.4.1).Normalita súboru údajov bola testovaná pomocou Shapiro-Wilkovho testu.Pre všetky porovnania boli použité neparametrické kritériá.Pre nepárové vzorky bol použitý Mann-Whitney test.Všetky testy boli obojstranné s nominálnym prahom významnosti P ≤ 0,05.
Počiatočná prieskumná analýza súboru údajov sa uskutočnila v R (verzia 4.0.3).To zahŕňa vývoj Spearmanovej jednorozmernej matice poradovej korelácie, kde korelácia medzi dvoma premennými je reprezentovaná veľkosťou a farbou štvorcov.Štatistická významnosť medzi asociáciami bola vypočítaná pomocou Spearmanovho rho, kde hodnoty ≤0,05 boli považované za významné.Porovnania, ktoré neboli štatisticky významné, boli vylúčené z matrice a označené prázdnymi bunkami.P-hodnoty boli upravené pre viacnásobné porovnania pomocou Holmovej korekcie.Na simuláciu vplyvu premenných v súbore údajov na pozitívnu reakciu na COVID-19 sa použil binárny logistický regresný model.Reakcie IFN-y T buniek a skóre anti-RBD/S1/S2/N IgG titrov boli prevedené na faktory, kde každý jedinec bol priradený k príslušnému kvartilu pre každé skóre.Potom bol vyvinutý počiatočný výskumný model pomocou funkcie glm v štatistickom balíku (V4.0.3).Pomery šancí odvodené z tohto pôvodného modelu boli extrahované z koeficientov modelu pomocou funkcie 'odds_plot' v balíku OddsPlotty (V1.0.2).Pri vývoji modelu krížovej validácie sme použili funkciu „bestglm“ z balíka bestglm (V0.37.3), aby sme obmedzili zaujatosť používateľov a zabezpečili, že je možné vybrať najlepšiu podmnožinu prediktorov.Zvolená metóda bola „vyčerpávajúca“ a informačné kritérium použité na posúdenie zhody modelu bolo AIC.Rovnaký pracovný postup opísaný vyššie sa použil na získanie pomeru šancí.
Viac informácií o dizajne štúdie nájdete v abstrakte štúdie Nature prepojenom s týmto článkom.
Listy a žiadosti o materiály by mali byť adresované Dr. Martinovi Scarrovi alebo profesorovi Andrewovi Godkinovi.Tento článok poskytuje pôvodné údaje.
R kód používaný na vytváranie štatistických modelov je verejne dostupný bez vyžiadania29.Informácie o opätovnej tlači a licencie nájdete na www.nature.com/reprints.
Munro, APS a kol.Bezpečnosť a imunogenicita siedmich vakcín COVID-19 ako tretej dávky (booster) po dvoch dávkach ChAdOx1 nCov-19 alebo BNT162b2 (COV-BOOST) v Spojenom kráľovstve: zaslepená, multicentrická, randomizovaná, kontrolovaná štúdia fázy 2.Lancet 398, 2258 – 2276 (2021).
Stewart, ASV a kol.Imunogenicita, bezpečnosť a reaktogenita heterológnej primárnej vakcinácie proti COVID-19 (Com-COV2) s použitím mRNA, vírusových vektorov a proteínových adjuvantných vakcín v Spojenom kráľovstve: fáza 2, jednoducho zaslepená, randomizovaná štúdia, test non-inferiority.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB a kol.Účinnosť vakcín proti COVID-19 u pacientov s oslabenou imunitou: Systematický prehľad a metaanalýza.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. a kol.Znížená neutralizácia SARS-CoV-2 mikrónového variantu B.1.1.529 sérom po imunizácii.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y a Baliser RD Prelomová infekcia u jedincov očkovaných proti SARS-CoV-2: meranie, príčiny a dôsledky.Národný kňaz imunológie.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG a kol.Oslabená imunitná humorálna odpoveď na vakcínu BNT162b2 Covid-19 na 6 mesiacov.N. eng.J. Medicine.385, e84 (2021).
Carreño, JM a kol.Aktivita rekonvalescentných a očkovacích sér proti SARS-CoV-2 Omicron.Príroda 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. a kol.Trvanie ochrany katarskej mRNA vakcíny proti SARS-CoV-2 Omicron BA.1 a BA.2 subvarianty.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ a kol.Frekvencia pamäťových B buniek klesá s prelomovou infekciou vakcíny COVID-19 delta.Molekulárna medicína EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. a kol.Krížovo reaktívne pamäťové T bunky sú spojené s ochranou kontaktov COVID-19 pred infekciou SARS-CoV-2.Národná komúna.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH a kol.Charakteristické reakcie T-buniek a B-buniek s omikrónmi SARS CoV-2 u príjemcov vakcíny COVID-19.veda.Imunológia.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu a kol.Zdedené T bunky špecifické pre SARS-CoV-2 krížovo rozpoznávajú varianty Omicron.Národná medicína.28, 472 – 476 (2022).
Scarr, MJ a kol.Meranie SARS-CoV-2-špecifických T buniek z plnej krvi odhaľuje asymptomatickú infekciu a imunogenicitu vakcíny u zdravých jedincov a pacientov s rakovinou solídnych orgánov Immunology https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT a kol.Rýchle meranie spike T buniek SARS-CoV-2 v plnej krvi očkovaných a prirodzene infikovaných jedincov.J. Clinical.investovať.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU a kol.Reakcia na očkovanie proti COVID-19 u pacientov so sklerózou multiplex.Inštalácia.Neuróny.91, 89 – 100 (2022).
Bradley RE a kol.Pretrvávajúca infekcia COVID-19 s Wiskott-Aldrichovým syndrómom zmizla po terapeutickom očkovaní: kazuistika.J. Clinical.Imunológia.42, 32 – 35 (2022).